La continua aparición de cepas bacterianas multirresistentes ha intensificado la necesidad de estrategias terapéuticas alternativas. Entre estas, el uso de biopelículas enriquecidas con ingredientes funcionales ha ganado creciente atención debido a sus propiedades antibacterianas. El objetivo del presente estudio fue determinar la actividad antibacteriana de fitocomplejos y su actividad protectora sobre bacterias asociadas a mastitis bovina para prevenir infecciones intramamarias y reducir la incidencia de mastitis bovina. Se formuló un fitocomplejo a partir de la mezcla de los extractos hidroalcohólicos de Larrea tridentata y Caesalpinia Coriaria, y de los aceites esenciales de Lippia graveolens y Syzygium aromaticum. La actividad antibacteriana se evalúo a través de la determinación de la Concentración mínima Inhibitoria y la Concentración mínima Bactericida frente a 12 cepas bacterianas asociadas con mastitis bovina. Se realizaron ensayos de cinética de muerte temporal y de integridad de membrana celular para elucidar el mecanismo de acción. Se llevaron a cabo análisis cromatográficos para caracterizar el fitocomplejo. La citotoxicidad se evaluó mediante el ensayo de letalidad en Artemia salina. Se obtuvo una biopelícula a base de almidón de chayotextle adicionada con el fitocomplejo por medio de la técnica de casting. La biopelícula fue caracterizada mediante Microscopía Electrónica de Barrido (SEM) y Espectroscopía Infrarroja por Transformada de Fourier (FTIR). La actividad antibacteriana se determinó mediante ensayos de difusión en disco y pruebas de inhibición del crecimiento bacteriano frente a Escherichia coli y Staphylococcus aureus, utilizadas como cepas indicadoras. Además, se utilizó un modelo estructural físico para evaluar la reducción del crecimiento bacteriano. El fitocomplejo presentó actividad inhibitoria a concentraciones de entre 0.39 mg/Ml y 6.34 mg/mL, mientras que las concentraciones mínimas bactericidas oscilaron entre 0.79 mg/mL y 25.38 mg/mL, ejerciendo su efecto bactericida durante los primeros 30 minutos de contacto, provocando la liberación de proteínas y ácidos nucleicos, evidenciando daño irreversible en la membrana citoplasmática. La actividad antibacteriana se asoció con la presencia de rutinosido de luteolina, rutinosido de apigenina, nor 3´-demetoxiisoguaiacina, ácido gálico, ácido elágico, eugenol y timol. El fitocomplejo no presentó citotoxicidad. La biopelícula adicionada con el fitocomplejo mostró zonas de inhibición de 10.25 mm a 24.75 mm, con mayor actividad frente a S. aureus. Se determinó una reducción del crecimiento de S. aureus y E. coli. La actividad antibacteriana se atribuyó a reordenamientos estructurales dentro de la matriz polimérica y la formación de interacciones entre los grupos funcionales presentes en el polisacárido y en el fitocomplejo. La biopelícula a base de almidón de chayotextle adicionada con el fitocomplejo demostró actividad antibacteriana in vitro frente a bacterias asociadas a mastitis bovina.