La lactancia materna representa una estrategia para favorecer la supervivencia, el crecimiento y el neurodesarrollo del recién nacido pretérmino; sin embargo, la separación de la díada madre-hijo durante la hospitalización en la Unidad de Cuidados Intensivos Neonatales (UCIN) puede dificultar su continuidad y mantenimiento. En este contexto, el profesional de enfermería desempeña un papel importante mediante acciones de orientación y apoyo dirigidas al cuidador primario. El presente estudio tuvo como objetivo describir el nivel de conocimiento sobre lactancia materna en cuidadores primarios de neonatos pretérmino hospitalizados en la UCIN, considerando el enfoque de la Teoría General de Enfermería de Dorothea Orem, específicamente la subteoría de los Sistemas de Enfermería, mediante el sistema de apoyo-educación. Para ello, se realizó un estudio piloto con enfoque cuantitativo, descriptivo y transversal, mediante un muestreo no probabilístico por conveniencia. La población estuvo conformada por 22 cuidadores primarios de neonatos pretérmino hospitalizados en una unidad de tercer nivel de atención. Para la recolección de datos se utilizó un Instrumento sobre Lactancia Materna, de elaboración propia, orientado a identificar conocimientos generales, barreras, creencias y aspectos relacionados con el apoyo y educación en lactancia materna. Los resultados mostraron que el 90.9% de los participantes identificó correctamente los beneficios inmunológicos de la leche materna, mientras que el 81.8% demostró conocimientos sobre la conservación de la leche materna. De igual manera, más del 80% reportó haber recibido orientación y capacitación sobre lactancia materna. Entre las principales barreras identificadas destacaron el estrés emocional (54.5%) y la separación madre-hijo (45.5%). Se concluye que el análisis descriptivo del nivel de conocimiento, percepciones y barreras del cuidador primario permite identificar necesidades educativas y áreas de oportunidad para futuras estrategias de promoción de la lactancia materna en neonatos pretérmino hospitalizados.