La resistencia antimicrobiana es uno de los principales problemas de salud pública y animal. En las últimas décadas, los antibióticos han sido fundamentales para el tratamiento de numerosas infecciones bacterianas; sin embargo, el uso indiscriminado e inapropiado de estos compuestos en la medicina clínica y en la producción ganadera ha favorecido la propagación de cepas resistentes. Este proceso limita significativamente las alternativas terapéuticas y aumenta la mortalidad asociada a infecciones antes tratables. Por lo tanto, existe un gran interés en identificar compuestos naturales con actividad antimicrobiana que puedan utilizarse como tratamiento alternativo para enfermedades infecciosas, reemplazando o complementando los antibióticos convencionales y reduciendo la resistencia a estos. El objetivo de esta investigación fue determinar el efecto antimicrobiano del ácido oleanólico (AO), un triterpeno natural presente en diversas plantas, frutas y hierbas medicinales, conocido por sus propiedades farmacológicas, incluidas las actividades antiinflamatorias, antioxidantes y antimicrobianas. En este estudio, se evaluó el AO frente a Staphylococcus aureus y Escherichia coli, y se analizó su efecto sobre células epiteliales infectadas por estas bacterias y posteriormente tratadas con AO. Se determinaron la concentración mínima inhibitoria (CMI), la concentración mínima bactericida (CMB) y el efecto sobre la viabilidad celular. Los resultados mostraron que el AO presentó actividad antimicrobiana, con efecto bactericida, contra ambas bacterias. Además, se demostró que, a concentraciones bajas y moderadas, el AO no causó citotoxicidad en las células A549. En conjunto, los hallazgos confirman que el AO posee un potencial terapéutico como agente antimicrobiano alternativo o adyuvante contra E. coli y S. aureus, lo que representa una opción prometedora para reducir el uso indiscriminado de antibióticos y contribuir a disminuir la resistencia antimicrobiana mediante compuestos de origen natural.