La resistencia a los antimicrobianos (RAM) es un problema importante de salud pública que ha impulsado la búsqueda de alternativas terapéuticas como los péptidos antimicrobianos. Los péptidos antimicrobianos son moléculas naturales con actividad antimicrobiana frente a diversos patógenos, incluidos los resistentes a los antibióticos convencionales. Staphylococcus aureus es un patógeno oportunista capaz de internalizarse en células epiteliales pulmonares, evadiendo la respuesta inmune y causando infecciones graves. Algunas cepas han mostrado ser resistentes a diversos antibióticos. El objetivo de este estudio fue demostrar el efecto de la nisina, una bacteriocina producida por Lactococcus lactis, sobre la infección por S. aureus ATCC 29740 en un modelo de neumocitos tipo II A549. Los resultados de este trabajo mostraron que S. aureus ATCC 29740 resistente a ampicilina, cefotaxima, dicloxacilina y penicilina; la concentración mínima bactericida (CMB) de la nisina contra S. aureus fue de 30 µg/μL y la IC50 de 16.38 µg/μL. En el modelo celular, interesantemente, los ensayos de citotoxicidad y la evaluación de especies reactivas del oxígeno (ROS) demostraron que la nisina no es citotóxica para los neumocitos tipo II A549 y no induce estrés oxidativo a la alta concentración de 300 µg/µL, manteniendo la viabilidad celular cercana a la de las células sin tratamiento. En los ensayos de infección celular, se observó que el tratamiento con nisina redujo significativamente la carga bacteriana de forma dependiente de la concentración. Mientras que a las concentraciones de 200 y 300 µg/µL de nisina se observó ausencia total de colonias viables y no se observaron cambios en la estructura celular de la monocapa. Estos hallazgos sugieren que la nisina es una alternativa terapéutica prometedora y segura para combatir las infecciones pulmonares asociadas a S. aureus.