La mastitis subclínica es una de las enfermedades más frecuentes en el ganado lechero, la cual afecta la calidad de la leche y genera grandes pérdidas económicas. El objetivo fue evaluar la adopción de medidas de higiene durante la rutina de ordeño sobre la reducción en la frecuencia de mastitis subclínica en bovinos en producción del Valle de Tulancingo de Bravo, Hidalgo. El ensayo se desarrolló en tres unidades de producción lechera ubicadas en las comunidades de San Nicolás Cebolletas y Napateco. Se utilizaron 38 vacas en total de tres distintos hatos. La mastitis subclínica se valoró mediante la prueba California para mastitis. Previo a la incorporación de las medidas de higiene, se realizaron tres muestreos y posteriormente se realizaron tres muestreos más. Los datos se analizaron con la prevalencia en cada momento y se construyeron tablas de contingencia para mostrar diferencias entre muestreos mediante Chi-cuadrada de Pearson (α=0.05). Antes de la incorporación de las medidas de higiene la prevalencia máxima fue de 69.73%, mientras que posterior a este manejo sanitario se redujo la prevalencia paulatinamente hasta el valor más bajo observado en el último muestreo (34.86%). En los distintos niveles de prueba de California, se tuvo que el grado 0 incrementó de 28.3% a 63.2%, mientras que la severidad se redujo en las categorías de la mastitis subclínica. La comparación entre muestreos mostró diferencias (χ²=41.21, P<0.05). En conclusión, la incorporación de medidas higiénicas en la rutina del ordeño puede asociarse con una disminución de la prevalencia de mastitis.