El género Croton tiene una gran variedad de metabolitos secundarios del tipo diterpeno, en los que se destacan los labdanos y clerodanos, estudios previos de distintas especies han mostrado resultados sobre diversas actividades biológicas como anticoagulante, antiinflamatoria, antiséptica, antiparasitaria, antimicrobiana y citotóxica. En esta investigación se recolectó la planta Croton mazapensis debido a que no cuenta con algún estudio químico o biológico. La planta es conocida como “Guaje de ratón”, “palo dulce” o “salvia”, un arbusto que se encuentra distribuido en México. En el presente trabajo se reporta la identificación y caracterización del extracto metanólico de la raíz de C. mazapensis de 2 diterpenos del tipo clerodano ya descritos como cascarillona (36) y velamona (37), y un nuevo diterpeno nombrado como mazapenolido A (38) mediante técnicas de purificación y separación como: maceración, cromatográficas (CCF y CC) y espectroscópicas (RMN de 1D y 2D y rayos X), por otro lado se realizaron pruebas computacionales con la finalidad de predecir sus propiedades fisicoquímicas y toxicológicas usando SwissADME y ADMETlab 3.0 para predicciones fisicoquímicas y farmacocinéticas, donde se obtuvieron resultados favorables dentro de los valores óptimos permitidos, además de información sobre su efecto al administrarse en el organismo mediante admetSAR, seguido de un estudio sobre las actividades biológicas como posibles blancos terapéuticos con el programa Way2drug que indica el uso como posible efecto como antineoplásico y antibacteriano. Igualmente se realizó el docking molecular sobre la interacción de los compuestos 36-38 con la enzima β-lactamasa (PDB:4KG5) el cual mostró interacción de los 3 compuestos con el sitio activo mediante puentes de hidrógeno con el grupo cetona, para realizar este estudio se usó el programa Autodock4 Tools y Discovery Studio. Finalmente, se evaluó la actividad antimicrobiana mediante la técnica de Kirby - Bauer, aplicando por goteo a distintas bacterias patógenas Gram positivas y Gram negativa con la finalidad de determinar la efectividad de los compuestos purificados contra el crecimiento bacteriano, teniendo como resultado la inhibición de 2 bacterias Gram positivas. Se logro la elucidación de la estructura molecular, la predicción de las propiedades biológicas in silico y la evaluación antimicrobiana.