La Economía Circular promueve el desarrollo sostenible reintroduciendo residuos agroindustriales como materias primas valiosas, aprovechando su disponibilidad, bajo costo y alto contenido de biomoléculas (Anaya Villalpanda, 2025). En este contexto, el objetivo central de este trabajo fue valorizar el lactosuero, un subproducto clave de la producción de queso, utilizándolo directamente como un sustrato de enriquecimiento en medios de cultivo para el crecimiento de microorganismos de interés biotecnológico. Inicialmente, se realizó la caracterización fisicoquímica de dos muestras de suero de leche dulce (SL1 y SL2) proporcionadas por la empresa Prounilac, determinando cuantitativamente parámetros clave como pH, porcentaje de ácido láctico, lactosa, humedad, lípidos y proteínas mediante métodos basados en Normas Oficiales Mexicanas (NOM). Posteriormente, se evaluó el crecimiento de cuatro microorganismos seleccionados en cinco formulaciones sólidas diferentes que combinaban medio artificial con distintas proporciones de lactosuero líquido. El Análisis Descriptivo de Frecuencias (para cuantificar el porcentaje de éxito de crecimiento, resultado binario) validó que, si bien el medio artificial sin lactosuero (T1) ofreció el mejor crecimiento general, las formulaciones con lactosuero impactaron diferencialmente el desarrollo celular. Los resultados confirmaron un efecto promotor significativo en tres de los cuatro microorganismos ensayados: Pichia anomala, Lactobacillus rhamnosus y Trichoderma harzianum. El mayor porcentaje de éxito se concentró en las formulaciones con concentraciones de lactosuero menores o iguales al 50% (T2 y T3), lo que indica que estas diluciones fueron estadísticamente eficaces para estimular el desarrollo de L. rhamnosus y P. anomala. Por el contrario, las formulaciones con altas concentraciones (T4 al 75% y T5 al 100%) registraron un porcentaje de éxito notablemente inferior, limitando el crecimiento. La única excepción fue la levadura P. anomala, que demostró ser la cepa más robusta, manteniendo un crecimiento abundante hasta las 96 horas en la totalidad de las formulaciones, siendo capaz de utilizar el lactosuero como sustrato único. Se concluye que, dada su rica composición nutricional y la evidencia de su desempeño como sustrato efectivo en diluciones menores al 50% para cepas clave (L. rhamnosus y T. harzianum), el lactosuero es una materia prima viable y prometedora para ser empleada eficazmente como fuente de carbono para la producción de biomasa celular y metabolitos de relevancia industrial.