La Tuberculosis (TB) es una de las 10 principales causas de mortalidad en el mundo. En 2015, 10.4 millones de personas enfermaron de TB y 1.8 millones murieron por esta enfermedad (entre ellos, 0.4 millones de personas con VIH), y más del 95 % de las muertes por TB se producen en países de ingresos bajos y medianos. En la actualidad ha surgido el reto de buscar nuevas, mejores y más eficaces opciones de tratamiento, que permita que los pacientes alcancen concentraciones terapéuticamente efectivas, con el propósito de mejorar las condiciones de la farmacoterapia, debido al desarrollo de farmacorresistencia en el tratamiento de la TB con los tratamientos de primera línea de elección. La manera de verificar que las concentraciones terapéuticas se alcancen, es a través de la medición de éstas; para ello, se implementan métodos analíticos para la cuantificación de fármacos, los cuales deben cumplir con estándares de calidad que aseguren un correcto análisis y que los datos obtenidos sean confiables. Esta confiabilidad la proporciona la validación de las metodologías analíticas; es decir, que se demuestre que el método establecido es lo suficientemente fiable para producir un resultado, de tal forma que antes de ser empleados de forma rutinaria en un laboratorio se asegure que los valores obtenidos cumplen los requerimientos de confiabilidad y reproducibilidad. El presente trabajo consta de una propuesta para validar un método analítico que permita cuantificar in vitro CFZ en plasma de ratas Wistar, con la finalidad de que este método analítico pueda ser el soporte de proyectos de investigación tales como la evaluación farmacocinética preclínica de nuevas formas farmacéuticas orales a base de CFZ, bajo los lineamientos de la NOM-SSA1-177-2013. En conclusión el método analítico propuesto arroja resultados confiables, exactos, precisos y reproducibles en el rango de 1-100 µg/mL.