La resistencia a antimicrobianos es una amenaza a la salud pública mundial que requiere una atención multidisciplinaria a través del enfoque “una salud”. Para su monitoreo Escherichia coli es considerada una bacteria indicadora que se incluye en diversos programas de vigilancia alrededor del mundo, sin embargo, en gran parte de éstos no se incluyen los animales de compañía. Considerando que la cercanía entre el ser humano y los caninos domésticos ha incrementado con el paso de los años, el objetivo del presente proyecto fue determinar la prevalencia de Escherichia coli resistente a antibacterianos en perros sanos de la zona conurbada de Pachuca, Hidalgo, para verificar el índice de multirresistencia en animales de compañía, mediante técnicas bacteriológicas y moleculares. Se obtuvieron 96 aislamientos de Escherichia coli a partir de hisopado rectal de perros clínicamente sanos, las cuáles mostraron alta resistencia a ampicilina (96.88%), carbenicilina (72.92%) y cefalotina (69.79%). Se evidenciaron niveles relevantes de resistencia a cefotaxima (30.21%) y ciprofloxacino (32.29%). Un total de 40.63% de las cepas presentaron un patrón de multirresistencia (Índice de Resistencia a Múltiples Antibacterianos = 0.53), con resistencia concomitante a tres o más familias de antibacterianos, incluyendo beta-lactámicos, fluoroquinolonas y fenicoles. El análisis molecular demostró que el 100% de las cepas analizadas portaron el gen cmlA, mientras que más del 70% portaban el gen blaTEM, blaCTX, gyrA, aac(6´)-Ib-cr o tetA, evidenciando la coexistencia de múltiples determinantes genéticos de resistencia con potencial de transferencia horizontal. El consumo de carne cruda en la dieta de los caninos, la medicación de los animales sin prescripción médica y la exposición ambiental se identificaron como factores de riesgo para presentar bacterias multirresistentes. La alta frecuencia de E coli multirresistente y la alta distribución de genes asociados con resistencia a antibacterianos críticos posicionan a los perros domésticos como un reservorio relevante de E. coli resistente, con implicaciones directas en la salud pública. Estos hallazgos remarcan la necesidad urgente de fortalecer la vigilancia epidemiológica y promover el uso racional de antibióticos en animales de compañía.