Los β-glucanos son polisacáridos presentes de forma natural en cereales, hongos, levaduras y algas marinas. Entre los cereales, se encuentran en mayor proporción en la cebada (Hordeum vulgare) y avena (Avena sativa). Estos β-glucanos tienen efectos beneficiosos para la salud y se han considerado para la inhibición de las células cancerígenas en los últimos veinte años. En la presente investigación, se realizó una caracterización química proximal para determinar la concentración de humedad, cenizas, grasa, fibra y proteína en granos de cebada y avena. Para la extracción de β-glucanos, se empleó un método de baño ultrasónico asistido con una amplitud del 100 %, una temperatura de 30±1°C, una frecuencia de 20 kHz y una relación soluto-solvente de 1:25, utilizando agua destilada como solvente, con variables de tiempo de 10, 20 y 30 min, los cuales se determinó en cada uno el porcentaje de pureza obtenido mediante un kit de prueba de β-glucanos (enlace mixto) de la marca "Megazyme". El tratamiento más efectivo en la relación pureza y rendimiento de las dos fuentes fue el de 20 min, obteniendo 81.39 y 83.16% de β-glucanos en la cebada y la avena, respectivamente. Se utilizó la aplicación de β-glucanos comerciales de alta pureza (≥95%) para comprobar su efecto anticancerígeno y los β-glucanos extraídos de cebada y avena se orientaron a la inhibición de células de cáncer de mama (MDA-MB-231) a diferentes concentraciones (0, 125, 250 y 500 µg de β-glucanos/mL) en un estudio in vitro de 24 horas, utilizando un ensayo colorimétrico para evaluar la viabilidad celular basada en la actividad metabólica (MTT) y comparar el efecto de cada fuente y tratamiento. El empleo de 500 µg/mL del β-glucano comercial redujo la viabilidad celular hasta un 70.84%, seguido del β-glucano de avena con 72.74% y de cebada con 74.59% (a la misma concentración de 500 µg/mL por 20 min), dando lugar al efecto anticancerígeno de β-glucano de avena y cebada aplicados en esta línea celular de cáncer de mama.