Purificación y caracterización parcial de la mutación GIy 122 por Arg de la triosafosfato isomerasa de humano (hTPI).

Álvarez Rodríguez, Armando

dc.contributor.author	Álvarez Rodríguez, Armando
dc.date.accessioned	2023-07-17T17:17:38Z
dc.date.available	2023-07-17T17:17:38Z
dc.date.issued	2008-12
dc.identifier.govdoc	LNUTR .6913 2008
dc.identifier.other	AT13583
dc.identifier.uri	http://dgsa.uaeh.edu.mx:8080/bibliotecadigital/handle/231104/3212
dc.description	La Triosafosfato isomerasa de humano (hTPI) es una enzima homodimérica de subunidades idénticas que interviene en la glucólisis. Se han reportado mutaciones de esta enzima que se relacionan con daños celulares y deficiencias que provocan enfermedades neurodegenerativas debido a un plegamiento no convencional y a la incapacidad de lograr una conformación nativa y funcional. Para dar pauta a los estudios del comportamiento de la hTPI que ha sufrido algún cambio estructural y funcional, se produjo una mutación cambiando el aminoácido Glicina (G) en la posición 122 por Arginina (R). Lográndose un porcentaje de purificación mayor al 98%, se caracterizó parcialmente para demostrar que ésta mutación provoca una modificación en el comportamiento comparativamente con la hTPI silvestre y con su forma nativa. Esta enzima fue desnaturalizada en presencia de urea y cloruro de guanidina (GuHCl), se siguió la emisión de fluorescencia y la recuperación de su actividad catalítica a las 24, 48 y 72 h, utilizando concentraciones de 5 y 50 µg/mL de proteína, los parámetros cinéticos se midieron en una concentración de 5 µg/mL. Los valores de la Vmax fueron, para la nativa 4.79 ±0.50 µmol/minmg, la renaturalizada en urea 21.83 ±1.53 µmol/minmg y la renaturalizada en GuHCl fue de 83.32 ±1.65 µmol/min*mg. La enzima renaturalizada en GuHCl presentó la mayor Vmax siendo 17 veces mayor que la nativa y 4.5 veces mayor a la alcanzada por la renaturalizada en urea. La Km para la enzima renaturalizada en GuHCl fue 20% mayor que el de la nativa, y la renaturalizada en urea fue un 6% menor. En el caso de la renaturalizada, en GuHCl fue 26% mayor que en urea. Los valores de Km fueron, para la nativa 0.98 ±0.10 mM, renaturalizada en urea 0.93 ±0.17 mM y la renaturalizada en GuHCl 1.18 ±0.05 mM, siendo en urea el caso con mayor afinidad de la enzima para la formación del complejo enzima-sustrato (ES). Por otro lado, la Kcat de la enzima mutada presentó los valores más bajos de eficacia para convertir al sustrato en producto, siendo para la nativa 0.0002551 x105 min-1, para las renaturalizadas 0.0011630 x105 min-1 y 0.0044389 x105 min-1 en urea y GuHCl respectivamente, en comparación con la Kcat reportada para la silvestre de 2.7 x105 min-1.	es_ES
dc.language.iso	es	es_ES
dc.publisher	ICSA-BD-UAEH	es_ES
dc.subject	Proteína	es_ES
dc.subject	Enzima	es_ES
dc.subject	Triosafosfato isomerasa de humano	es_ES
dc.subject	Plegamiento	es_ES
dc.subject	Mutación	es_ES
dc.subject	Renaturalización	es_ES
dc.title	Purificación y caracterización parcial de la mutación GIy 122 por Arg de la triosafosfato isomerasa de humano (hTPI).	es_ES
dc.title.alternative	Nutrición	es_ES
dc.type	Tesis	es_ES